大腸桿菌是一種兼性厭氧菌，最適生長溫度為37°C。我們?yōu)槠涮峁└缓荚?、氮源、維生素和礦物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基——LB培養(yǎng)基（Luria-Bertani培養(yǎng)基）。在液體培養(yǎng)基中，菌體會(huì)均勻增殖，使培養(yǎng)基變渾濁；在添加了瓊脂的固體培養(yǎng)基上，單個(gè)細(xì)菌會(huì)固定生長并繁殖形成一個(gè)肉眼可見的菌落。

一、常用配置：

• 溫度：37℃

• 轉(zhuǎn)速：200-250 rpm振蕩培養(yǎng)12-16小時(shí)（過夜）

二、方案原理：

• 典型場景：大腸桿菌的培養(yǎng)

配置參數(shù)與原理：

• 溫度：37℃

大腸桿菌是人體腸道中的共生菌，其最適生長溫度與人體體溫一致（37℃）。在此溫度下：

細(xì)胞代謝酶（如DNA聚合酶、核糖體等）活性最高，DNA復(fù)制、蛋白質(zhì)合成等生命活動(dòng)效率較大化。

若溫度低于30℃：酶活性下降，代謝減緩，繁殖速度顯著降低。

若溫度高于42℃：可能觸發(fā)熱休克反應(yīng)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

• 轉(zhuǎn)速：150-200 rpm（振蕩培養(yǎng)）

氧氣供應(yīng)：大腸桿菌雖為兼性厭氧菌（可在有氧/無氧條件下生長），但有氧呼吸能顯著提升能量（ATP）產(chǎn)量，加速繁殖。振蕩使培養(yǎng)液形成渦流，增加氣液接觸面積，提高溶氧量。

營養(yǎng)均勻分布：避免局部營養(yǎng)物質(zhì)耗盡或代謝廢物積累，確保所有細(xì)菌處于相似的生長環(huán)境。

防止沉淀：避免細(xì)胞或營養(yǎng)物質(zhì)沉降，維持懸浮狀態(tài)。

轉(zhuǎn)速范圍選擇：

150 rpm：適合對(duì)剪切力敏感的菌株或高密度培養(yǎng)（減少機(jī)械損傷）。

200 rpm：較大化溶氧和營養(yǎng)混合效率，適合快速擴(kuò)增。

＞250 rpm：可能因剪切力過強(qiáng)破壞細(xì)胞膜，反而抑制生長。

• 擴(kuò)增培養(yǎng)的其他關(guān)鍵因素

培養(yǎng)基成分：如LB培養(yǎng)基（胰蛋白胨、酵母提取物、NaCl）提供氮源、碳源和無機(jī)鹽；若需高密度培養(yǎng)，可能改用TB（Terrific Broth）等富營養(yǎng)培養(yǎng)基。

初始接種量：通常為1:100或1:50稀釋，確保細(xì)菌快速進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期。

pH控制：維持pH 7.0-7.2（通過緩沖體系如磷酸鹽），避免酸性/堿性環(huán)境抑制酶活性。

• 應(yīng)用場景示例

質(zhì)粒擴(kuò)增：在含抗生素的LB培養(yǎng)基中擴(kuò)增攜帶目標(biāo)質(zhì)粒的大腸桿菌，用于后續(xù)基因克隆。

蛋白表達(dá)：在TB培養(yǎng)基中誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白，結(jié)合溫度調(diào)控（如30℃誘導(dǎo)以減少包涵體形成）。